1. Блоттинг: виды, характеристика, сферы использования.
2. Спектральные методы анализа ДНК и белков.
3. Электрофорез белков и нуклеиновых кислот в гелях.
4. Способы определения концентрации и степени очистки белков
1. Блоттинг: виды, характеристика, сферы использования.
Блоттинг (от англ. Blot) — общее название методов молекулярной биологии по переносу определённых белков или нуклеиновых кислот из раствора, содержащего множество других молекул, на какой-либо носитель (мембрану из нитроцеллюлозы, PVDF или нейлона) в целях последующего анализа. В одних случаях молекулы предварительно подвергаются гель-электрофорезу, в других — переносятся непосредственно на мембрану. После блоттинга молекулы визуализируются посредством различных методов:
-Окрашивание (например, окрашивание белков серебром).
2. Спектральные методы анализа ДНК и белков.
Спектральные методы широко используются для качественного и количественного анализа белков и пептидов:
-спектры поглощения в ультрафиолетовой и видимой области спектра (UV-VIS-спектроскопия) несут ценную информацию о состоянии соответствующих хромофоров, включая пептидную группу, радикалы ароматических аминокислот, кофакторы, коферменты;
-дисперсия оптического вращения (ДОВ) и круговой дихроизм (КД-спектроскопия)позволяют количественно определять вторичную структуру
3. Электрофорез белков и нуклеиновых кислот в гелях.
Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а положительно заряженные белки - к катоду (-).
Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле и др. В отличие от электрофореза на бумаге,
4. Способы определения концентрации и степени очистки белков
Для определения концентрации белков в биологических жидкостях и растворах используются оптические, колориметрические и азотометрические методы.
Оптические методы основаны на оптических свойствах белков. К ним относятся:
-спектрофотометрические методы, оценивающие интенсивность поглощения белками УФ лучей в диапазоне около 200 нм и 260 нм. Степень УФЛ - поглощения пропорциональна концентрации белка;
