1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2. ОСНОВЫ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ. ПОНЯТИЕ ЗОНДА И МЕТКИ. ТРЕБОВАНИЯ К ФЛУОРЕСЦИРУЮЩЕМУ ХРОМОФОРУ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Тонкослойная хроматография – хроматографический метод, основанный на использовании тонкого слоя адсорбента в качестве неподвижной фазы.
Он основан на том, что разделяемые вещества по-разному распределяются между сорбирующим слоем и протекающим через него элюентом, вследствие чего расстояние, на которое эти вещества смещаются по слою за одно и то же время, различается.
Тонкослойная хроматография предоставляет большие возможности для анализа и разделения веществ, поскольку и сорбент, и элюент могут варьироваться в широких пределах [6].
При этом коммерчески доступен ряд пластинок с различными сорбентами, что делает возможным быстрое и рутинное использование метода. Разновидностью тонкослойной хроматографии является более надёжная и воспроизводимая высокопроизводительная тонкослойная хроматография, при проведении которой используются специальные пластинки и сложное оборудование.
Тонкослойная хроматография была открыта в 1889 году, существенно развита в середине XX века и до настоящего времени широко используется в фармацевтической, медицинской, пищевой сферах, а также в академической и промышленной науке.
Тонкослойная хроматография имеет несколько способов, связанных, в основном, с видом движения растворителей:
1. Восходящая тонкослойная хроматография.
2. Нисходящая тонкослойная хроматография.
3. Горизонтальная тонкослойная хроматография.
2. ОСНОВЫ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ. ПОНЯТИЕ ЗОНДА И МЕТКИ. ТРЕБОВАНИЯ К ФЛУОРЕСЦИРУЮЩЕМУ ХРОМОФОРУ
Флуоресценция представляет собой одну из разновидностей «холодного свечения» молекул – люминесценци. Люминесценция обладает двумя свойствами, принципиально отличающими ее от других излучательных и безызлучательных процессов с участием света: отсутствием зависимости от температуры и большой длительностью, значительно превышающей период излучаемой световой волны.
Флуоресценция наблюдается в жидкой, твердой и газовой фазах. При комнатной температуре практически все молекулы находятся на нулевом колебательном подуровне основного состояния, поэтому поглощение происходит с этого уровня.
Испускание флуоресценции происходит с нулевого колебательного подуровня первого возбужденного состояния. Поэтому общим переходом в поглощении и испускании является переход между нулевыми колебательными подуровнями основного и возбужденного состояний – так называемый О-О-переход.
Энергия О-О-перехода наименьшая в поглощении и наибольшая в испускании. Частоту О-О-перехода нетрудно найти по частоте, соответствующей пересечению спектров поглощения и испускания. Для сложных молекул О-О-переход в спектре флуоресценции находится при несколько меньшей частоте, чем О-О-переход в спектре поглощения.
Это становится понятным, если учесть сольватацию молекулы флуорофора в основном и электронно-возбужденном состояниях молекулами растворителя в результате диполь-дипольного взаимодействия. При возбуждении изменяются постоянный дипольный момент и поляризуемость, поэтому изменяется и степень сольватации.
1. Волькенштейн, М.В. Биофизика: Учебное пособие / М.В. Волькенштейн. - СПб.: Лань, 2012. - 608 c.
2. Джаксон, М.Б. Молекулярная и клеточная биофизика / М.Б. Джаксон. - М.: Бином, 2015. - 551 c.
3. Кабиров, Г.Ф. Тонкослойная хроматография - экспресс метод анализа химических соединений / Г.Ф. Кабиров, Р.Г. Кадырова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 205. - С. 88-94.
4. Конюхов, В. Ю. Хроматография / В.Ю. Конюхов. - М.: Лань, 2016. - 224 c.
5. Сон, К.Н. Биофизика: Учебное пособие / К.Н. Сон, В.И. Родин, Э.В. Бесланеев. - СПб.: Лань П, 2016. - 608 c.
6. Сычев, К. С. Практическое руководство по тонкослойной хроматографии / К.С. Сычев. - М.: Техносфера, 2010. - 280 c.
