Синтез рекомбинантного соматостатина

В Национальном медицинском центре «Хоуп» (Калифорния, США) был синтезирован гормон гипоталамуса – соматостатин. Молекула соматостатина состоит из 14 аминокислотных остатков. Соматостатин подавляет выделение инсулина и гормона роста человека.  Соматостатин был назван так потому, что впервые был выделен из гипоталамуса как фактор, подавляющий секрецию гормона роста. Соматостатин - циклический пептид, синтезируемый в виде большого прогормона (мол. масса около 11 500) в D- клетках островков поджелудочной железы. Скорость транскрипции гена просоматостатина значительно повышается под действием сАМР. Прогормон вначале превращается в 28-членный пептид и в конце 14 аминокислотных остатков (рисунок 1). Биологической активностью обладают все формы гормона.

Впервые о получении трансгенных сельскохозяйственных животных сообщили две лаборатории в США и Германии (Hammer et al, 1985; Brem et al., 1985). В обоих случаях для переноса генных конструкций в эмбриональные линии был использован метод микроинъекции. Этот метод и сегодня остается наиболее широко используемым для трансгенеза в животноводстве. Суть метода микроинъекции заключается во введении раствора генных конструкций в мужской пронуклеус зигот. Обычно инъецируют 1-2 пкл раствора ДНК в концентрации, соответствующей 1000 копиям в 1 пкл микроинъекционного раствора. При этом исходят из того, что количество 1000 копий/пкл приблизительно соответствует концентрации X нг/мкл, где X - длина генной конструкции в тысячах парах нуклеотидов (т.п.н). Например, если длина генной конструкции равна 10 т.п.н., то количество 1000 копий в 1 пкл будет достигаться при концентрации равной 10 нг/мкл.

Фенилкетонурия, врожденное нарушение обмена фенилаланина, в огличие от алкаптонурии может оказывать сильное разрушительное действие на организм. Нелеченные больные с фенилкетонурией почти всегда отличаются резко выраженной умственной отсталостью. Действительно, примерно у 1% пациентов психиатрических клиник обнаруживается фенилкетонурия. Вес мозга таких больных ниже нормы, у них нарушена миелинизация нервов, отмечается гиперактивность рефлексов. Продолжительность жизни нелеченных больных резко сокращена. Половина из них умирает в возрасте 20 лет, три четверти-в возрасте 30 лет. Фенилкетонурия вызывается отсутствием или недостатком фенилаланин-гидроксилазы или, реже, ее тетрагидробиоптеринового кофактора. Фенилаланин не может превратиться в тирозин и поэтому накапливается во всех жидкостях тела. Некоторые превращения фенилаланина, количественно несущественные в норме, становятся за-метными при фенилкетонурии. Наиболее значительным из них является трансаминирование фенилаланина с образованием фенилпирувата (рисунок 6). В основе самого названия болезни лежит высокое содержание этого фенилкетона в моче. Из фенилпирувата образуются фениллактат, фенилацетат и о-гидроксифенилацетат. а-Аминогруппа глутамина образует амидную связь с карбоксильной группой фенилацетата, давая фенилапетилглутамин.